Занятие 4

Тема: Дополнительные и лабораторные гинекологические исследования

Цель: Ознакомиться с дополнительными (пертубация, хромогидротубация) и лабораторными методами гинекологических исследований

План: 1. Методика проведения пертубации и хромогидротубации. Биопсии и микроскопии эндометрия.

2 Лабораторные исследования.

3. Классификация бесплодия.

Литература: 1. Шипилов В.С., Зверева Г.В., Родин И.И., Никитин В.Я. Практикум по акушерству, гинекологии и искусственному осеменению сельскохозяйственных животных М., Агропромиздат,1988 г., стр.281 – 292.

При определении состояния полового аппарата следует иметь в виду, что возраст самок, условия кормления и содержания откладывают отпечаток на изменения матки и яичников как при беременности, так и бесплодии самок. Кроме того, нередко заболевания полового аппарата протекают при неясных клинических признаках. Поэтому при гинекологической диспансеризации коров и тёлок рекомендуется использовать более точные методы исследования клинического и лабораторного направления, так как при вагинальном и ректальном исследовании не всегда удаётся уловить наличие патологического процесса в органах размножения. Такие дополнительные анализы не только облегчают постановку диагноза, но и дают ценные сведения для прогноза и выбора способа терапии.

Так, для диагностики заболеваний яйцеводов в настоящее время предложена методика пертубации и хромогидротубации и их сочетание: применение этих методик имеет не только диагностическое, но и лечебное значение, так как вводимый в яйцеводы воздух выталкивает скопившуюся слизь, которая нередко может быть в яйцеводах и нарушает функциональное состояние яичников. Применение при хромогидротубации специальной жидкости, содержащей метиленовую синьку, новокаин и антибиотики, положительно действует при воспалительных процессах в фаллопиевых трубах. Однако наша промышленность не выпускает аппаратов для проведения пертубации и хромогидротубации, а поэтому ветеринарный врач должен организовать производство такого аппарата на месте. Наиболее простым аппаратом для пертубации у коров следует считать аппарат В.И. Шницара. Аппарат стоит из манометра, шаров Ричардсона, катетера, на котором укреплён обтуратор для плотного закрытия шейки матки. После введения катетера в канал шейки матки постепенно нагнетают воздух в матку с помощью шаров Ричардсона, наблюдая всё время за стрелкой манометра. Доведя давление до 60 мм рт. ст., делают 2 мин. Перерыв, а затем продолжают накачивать воздух. При пертубации можно определить нормальную проходимость, сужение и непроходимость яйцеводов. Если трубы проходимы, то стрелка манометра, поднявшись до деления 60-8 мм, начинает падать, так как воздух выделяется через брюшные отверстия труб и давление в полости матки падает. При сужении и односторонней проходимости труб стрелка манометра при достижении давления 80-120 мм рт.ст. падает медленно. При непроходимости яйцеводов доведение давления до 100-120 мм рт. ст. не даёт эффекта, стрелка манометра удерживается на одном уровне. Для коров максимальным считают давление 100, а для тёлок – 130 мм рт. ст. Для хромогидротубации используют 0,2%-ный раствор метиленовой синьки на 1%-ном растворе новокаина. Растворы готовят так: к 60 мл 1%-ного водного раствора метиленовой синьки добавляют по 3 млн. ЕД пенициллина и стрептомицина и 1%-ным раствором новокаина доводят объём жидкости до 300 мл. Раствор стерилизуют кипячением на водяной бане. Жидкость температурой 40-42° С вводят с помощью аппарата для пертубации, к которому присоединяют колбу от аппарата Боброва. Катетер вводят в шейку матки как при пертубации, нагнетают воздух до давления 60 мм рт. ст., а после 2 мин перерыва продолжают нагнетать воздух до 100 у коров, до 130 мм у тёлок. В матку коров вводят до 200-300 мл раствора, а тёлкам – до 100 -200 мл. Через 3,6,12 и 24 часа у самки катетером берут мочу в одинаковые по цвету и диаметру пробирки. Показателем проходимости яйцеводов является окраска мочи в зелёный цвет через 3-6 часов после введения раствора метиленовой синьки. Через 12-15 часов окраска мочи исчезает. При двухсторонней непроходимости цвет мочи не изменяется, так как раствор метиленовой синьки не ожжет всасываться бахромкой и брюшиной, а следовательно, выделяться через почки с мочой. Перед проведением пертубации и хромогидротубации корову фиксируют в станке, вводят под кожу 5-7 мл 0,15%-ного раствора сернокислого атропина для снятия спазма яйцеводов.

Кроме того, необходимо помнить, что эти процедуры можно проводить только у коров и тёлок, у которых исключены воспалительные процессы полового аппарата и при строгом соблюдении показателя давления.

Биопсия эндометрия является важны диагностическим приёмом, позволяющим установить бесплодие, обусловленное патологическими изменениями в матке самок и протекающее без ясных клинических признаков. Сочетание биопсии эндометрия с гистологическим исследованием биопсийного материала особенно целесообразно проводить у коров и тёлок, у которых половые циклы протекают регулярно и которых многократно осеменяют.

Лабораторные исследования. Включают: бактериологическое исследование экссудата из влагалища и матки, клеточного состава цервикально-вагинальной слизи, проведение проб для диагностики атонии и гипотонии матки, эндометритов и др.

Бактериологическое исследование проводят для выявления в экссудате половых органов возбудителя трихомоноза, вибриоза, а также условно патогенных микроорганизмов и грибов согласно существующим положениям с учётом особенностей роста того или иного микроорганизма или гриба на питательных средах.

Исследование цервикально-вагинальной слизи

Готовят мазки-отпечатки и окрашивают по Романовскому-Гимза. В мазке подсчитывают эпителиальные клетки большие (Б), средние (С), малые (М), безъядерные (Бя), деформированные (Дф), а наличие форменных элементов крови и слизи отмечают знаками + или – (обилие +++, умеренное количество ++, незначительное количество + и отсутствие -). В мазке подсчитывается 500 клеток.

Клеточный состав цервикально-вагинальной слизи у коров

Фазы течки | Б | С | М | Бя | Дф
Предтечка | 36-61 | 18-35 | 8-37 | до 6 | -
Течка | 63-70 | 20-37 | 6-22 | до 6 | -
Послетечковая | 45-66 | 20-37 | 9-21 | 2-4 | -
Фаза уравновешивания | 2-12 | 9-20 | 71-78 | нет | -

При остром эндометрите в мазке превалируют средние клетки и появляются деформированные, при хроническом катаральном эндометрите содержится до 6% безъядерных и до 55% больших клеток, от 1 до 6 % деформированных при наличии небольшого количества клеток среднего размера. При фолликулярных кистах яичников количество средних эпителиальных клеток доходит до 43-69%, тогда как больших и малых бывает сравнительно мало, а безъядерные полностью отсутствуют. При касте жёлтого тела и персистентном жёлтом теле наступает резкий сдвиг картины мазков вправо.

Проба осаждения для диагностики эндометритов (И.С.Нагорный, Г.Н. Калиновский) В пробирку наливают 2 мл лохий и добавляют 2 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты или раствора этакридина лактата (риванола) 1:1000. При нормальном течении послеродового периода образуется сгусток муцина, не разбивающийся при встряхивании и осаждающаяся жидкость остаётся прозрачной. При острых послеродовых эндометритах образуется осадок, и при лёгком встряхивании пробирки жидкость мутнеет.

Проба Катеринова на инволюцию матки. В пробирку наливают 3-5 мл дистиллированной воды и добавляют слизь из шейки матки величиной с горошину. Смесь кипятят 1-2 мин. При законченной инволюции матки жидкость остаётся прозрачной, а при субинволюции остаётся мутной с хлопьями.

Реакция (РН) цервикальной слизи определяют с помощью РН-метра. При этом наиболее объективные данные получают при измерении рН слизи непосредственно в шейке матки коровы, что легко достигается во время стадии возбуждения. С помощью удлинителя через вагинальное зеркало электрод рН-метра вводят в канал шейки матки, не прикасаясь к её стенкам. У стельных коров электрод прикладывают к слизистой пробке шейки матки. Нормальными показателями рН являются 7,1-7,8.

Эксперсс-метод диагностики гипотонии матки и эндометритов у коров (по В.С. Дюденко). Метод основан на повышении содержания в лохиях и эстральной слизи индикана при нарушении сократительной способности матки и наличии токсических веществ ароматического ряда (индол, скатол и др.) при эндометритах.

Руку в полиэтиленовой перчатке вводят во влагалище, берут лохи или слизь около шейки матки и помещают в баночку или пробирку, на которых пишут номер и кличку коровы. Исследование материала проводят обычно сразу. Его можно также хранить в прохладном месте 2-3 часа. Лохи берут у коров на 5-6 день после осложнённых родов, эстральную слизь в стадии возбуждения у коров, которые неоднократно осеменялись. В пробирку наливают 5 мл лохий и добавляют 5 мл 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, смешивают и оставляют на 3-4 минуты, а затем фильтруют через бумажный фильтр. В центрифужную пробирку помещают 4 мл фильтрата, добавляют 1 мл 5%-ного раствора тимола, перемешивают, добавляют 6 мл специального реактива и оставляют на 1 час. Потом в эту же пробирку приливают 1 мл смеси хлороформ - этилового спирта, перемешивают и центрифугируют 5 ин при скорости 1-2 тыс. об/мин.

Оценка реакции:

А) прозрачный хлороформ /-/ - сокращение матки в пределах нормы;

Б) светло-розовый /+/ - незначительное нарушение сократительной функции матки;

В) розовый цвет /++/ - гипотония матки;

Г) розово-фиолетовый цвет /+++/ - гипотония матки или атония матки;

Д) фиолетовый цвет хлороформа /++++/ - атония матки.

Для диагностики эндометритов в пробирку помещают 2 мл лохий или эстральной слизи, добавляют 2 мл 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, смешивают стеклянной палочкой и фильтруют через бумажный фильтр.

К 2 мл фильтрата добавляют 0,5 мл азотной кислоты и осторожно кипятят 1 мин. После охлаждения к смеси приливают 1,5 мл 33%-ного раствора едкого натрия.

Оценка реакции:

А) прозрачный раствор /-/ - отсутствие воспаления матки;

Б) раствор прозрачный с незначительным зеленоватым оттенком /+/ - слабое воспаление матки;

В) желтовато-зелёный цвет раствора /++/ - легко протекающий катаральный эндометрит;

Г) янтарный цвет /+++/ - тяжёлая форма катарального эндометрита; Д) оранжевый цвет раствора /++++/ - гнойно – катаральный эндометрит.

Биохимический анализ сыворотки крови включает определение каротина, общего белка и кальция, неорганического фосфора, а также определение резервной щелочности по методикам, описанным в специальных инструкциях и рекомендациях.

Морфологический анализ крови, определение содержания в ей эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов, а также анализ мочи проводят по общепринятым методикам.

Генетические исследования проводят с использованием методов генетико – математического анализы. При этом учитывают такие показатели воспроизводительной функции по коровам и их дочерям, матерям и дочерям используемых быков: индекс осеменения и оплодотворяемость, продолжительность беременности и периода между отёлами, частоту абортов, патологии родов, кисты яичников и многоплодие. При оценке плодовитости быков также устанавливают влияние наследственности на объём эякулята, концентрацию спермы, активность и выживаемость спермиев.

Показатель пожизненной воспроизводительной способности (ППВС) вычисляют по формуле Уил –Кокса:

ППВС = n - 1 х 365/ Д х 100

где n – число телят;

Д – число дней между первым и вторым отёлом.

Цитологический экспресс-метод диагностики фримартинизма крупного рогатого скота основан на появлении в тканях костного мозга тёлок – фримартинов клеток мужского типа (метод описан И.Д.Гольдман, И.К. Живалёвым и Н.Н. Кузиной). Пунктат костного мозга (0,5-1,5 мл) помещают в центрифужную пробирку с 0,5 мл среды 199, 0,25 мл 0,004%-ным раствором колхицина и несколькими крупинками порошка гепарина. Пробирку герметически закрывают и 30-40 минут выдерживают в термостате при температуре 37° С. Затем 10 мин центрифугируют при 100-1200 об/мин. При этом отделяется питательная среда, и клетки костного мозга ресуспендируют в 5,0 мл 0,7%-ного раствора основного цитрата натрия при температуре 37° С в течение 30 минут. Повторным центрифугированием удаляют гипотонический раствор. Клетки на 30 мин помещают в 5 мл охлаждённой до температуры 4° С смеси, состоящей из трёх частей абсолютного метилового спирта и одной части ледяной уксусной кислоты. Фиксатор удаляют центрифугированием и в таком же объёме заменяют 40%-ной уксусной кислотой. После 10 минутной экспозиции центрифугированием концентрируют клетки и ресуспендируют их в 0,5-1,0 мл новой порции 45%-ной уксусной кислоты. Из этой суспензии готовят препараты хромосом – на подогретое до 50-60° С предметное стекло наносят 2-3 капли суспензии клеток костного мозга, которые равномерно распределяют на поверхности стекла при его лёгком покачивании. После подсушивания в струе тёплого воздуха препараты окрашивают по Романовскому – Гимза. Кариотип крупного рогатого скота состоит из 60 хромосом, среди которых 58 аутосом аутоцентрического типа и две субцентрического типа половые хромосомы – большая - Х и маленькая –у.

Гинекологическая диспансеризация позволяет установить ту или иную форму бесплодия.